把Cas9 protein 和 sgRNAs 加入到稀释液中(0.25 mM EDTA/10 mM TrisHCl, pH7.4)，注射前，在37℃中放置10min。浓度是：Cas9，50ng/µl；sgRNA 是 30ng/µl.

把准备好的Cas9 protein 和sgRNAs 混合液通过显微注射，注射到受精后16-18h的胚胎细胞质中。我们发现50ng/μl Cas9 和 30 ng/μl sgRNA 混合液非常有效，且不干扰胚胎细胞正常的分裂增殖。21个细胞中有12个细胞的基因被切割了。

注射了的胚胎细胞培养48个小时后，再提取细胞的基因组，通过PCR扩增剪切位点的DNA序列，分析编辑的效果。

   测序后，基因编辑结果：第一个是原始序列，后面的是编辑后的序列。-19代表删除了19个碱基，+3代 表插入了3个碱基。红色代表sgRNA，绿色代表PAM motif 。

                                 注射后对胚胎细胞的发育没有影响

CRISPR/Cas9-mediated gene editing in human zygotes using Cas9 protein